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Monogalactopiranosídeos de fluoresceína e éster metílico de fluoresceína: síntese, hidrólise enzimática por β-galactosidase biotnilada e determinação do coeficiente de difusão translacional

Monoglicosídeos de fluoresceína (d-galactopiranósido (FMG) e d-glicopiranósido) e seu éster metílico (MFMG) foram preparados a partir de acetobromoglicose/galactose e éster metílico de fluoresceína com bons rendimentos.Experimentos de hidrólise enzimática (usando β-galactosidase biotinilada) dos derivados galacto foram realizados e parâmetros cinéticos foram calculados.Um aumento de 15 a 20 vezes na intensidade da fluorescência foi observado durante a hidrólise.Um aumento linear da fluorescência foi notado em curto tempo e baixa concentração de substrato, tornando esses compostos sondas úteis e sensíveis para galactosidases.A magnitude do valor da constante de Michaelis-Menten (Km) para MFMG é maior do que a de FMG sugerindo uma possível mudança conformacional do substrato fluorogênico.O valor de Km para β-Gal biotinilada com FMG é menor do que para a enzima nativa.Esta observação indica maior afinidade de substrato da enzima biotinilada em comparação com a enzima nativa.Os coeficientes de difusão translacional foram medidos, para ambos os substratos fluorogênicos e ambos os produtos, empregando espectroscopia de correlação de fluorescência.Os coeficientes de difusão translacional para substratos fluorogênicos e os produtos de hidrólise enzimática foram medidos como semelhantes, na faixa de 3,5–4,5 × 10−10 m2 s−1.Assim, um aumento ou retardo da cinética enzimática devido à diferença na mobilidade translacional do substrato e do produto não é tão aparente.