Produtos

A utilização melhorada de nitrogênio no gado é importante para garantir uma produção pecuária sustentável.Como as purinas e pirimidinas (PP) constituem uma parte apreciável do nitrogênio ruminal, um melhor entendimento da absorção e metabolismo intermediário do PP é essencial.O presente trabalho descreve o desenvolvimento e validação de um método sensível e específico para determinação simultânea de 20 purinas (adenina, guanina, guanosina, inosina, 2'-desoxiguanosina, 2'-desoxinosina, xantina, hipoxantina), pirimidinas (citosina, timina, uracil, citidina, uridina, timidina, 2'-desoxiuridina) e seus produtos de degradação (ácido úrico, alantoína, β-alanina, ácido β-ureidopropiônico, ácido β-aminoisobutírico) no plasma sanguíneo de vacas leiteiras.A técnica baseada em cromatografia líquida de alto desempenho acoplada à espectrometria de massa em tandem de ionização por eletrospray (LC-MS/MS) foi combinada com padrões de calibração de correspondência de matriz individual e compostos de referência isotopicamente marcados estáveis.A análise quantitativa foi precedida por um novo procedimento de pré-tratamento que consiste em precipitação com etanol, filtração, evaporação e reconstituição.Parâmetros de separação e detecção durante a análise LC-MS/MS foram investigados.Foi confirmado que usar um modelo de calibração logarítmica em vez de um modelo de calibração linear resultou em CV% mais baixo e um teste de falta de ajuste demonstrou uma regressão linear satisfatória.O método abrange faixas de concentração para cada metabólito de acordo com as amostras reais, por exemplo, guanina: 0,10-5,0 μmol/L e alantoína: 120-500 μmol/L.Os CV% para as faixas de quantificação escolhidas ficaram abaixo de 25%.O método apresenta boa repetibilidade (CV%≤25%) e precisão intermediária (CV%≤25%) e excelentes recuperações (91-107%).Todos os metabólitos demonstraram boa estabilidade a longo prazo e boa estabilidade dentro das corridas (CV%≤10%).Diferentes graus de efeitos absolutos de matriz foram observados no plasma, urina e leite.A determinação dos efeitos relativos da matriz revelou que o método era adequado para quase todos os metabólitos de PP examinados no plasma extraído de uma artéria e das veias portal hepática, hepática e gastroesplênica e, com algumas exceções, também para outras espécies, como frango, porco, vison, humano e rato.