Existem muitos heróis desconhecidos ao nosso redor, que parecem ser comuns, mas na verdade eles silenciosamente contribuem muito para nós.A proteinase K é o “herói desconhecido” na indústria de diagnóstico molecular, embora comparada com o “grande e poderoso” na indústria, a proteinase K é tão discreta que há muito tempo negligenciamos sua importância.Com o surgimento da nova epidemia da coroa, a demanda por proteinase K disparou, e a oferta no país e no exterior está muito atrás do consumo, e todos de repente perceberam que a proteinase K é tão importante.
Para que serve a proteinase K
A proteinase K é uma serina protease com atividade enzimática proteolítica e pode manter a atividade em uma ampla gama de ambientes (pH (4-12,5), tampão com alto teor de sal, alta temperatura de 70°C, etc.).Além disso, a atividade da proteinase K não é inibida por SDS, ureia, EDTA, cloridrato de guanidina, isotiocianato de guanidina, etc., e uma certa quantidade de detergente também pode aumentar a atividade da proteinase K. No tratamento médico (desinfecção viral e microbiana ), alimentar (amolecimento da carne), couro (amolecimento do cabelo), vinificação (clarificação do álcool), preparação de aminoácidos (penas degradadas), extracção de ácidos nucleicos, hibridação in situ, etc., proteinase K Existem aplicações.A aplicação mais comumente usada é a extração de ácidos nucleicos.
A proteinase K pode enzimolizar todos os tipos de proteínas na amostra, incluindo as histonas que estão fortemente ligadas aos ácidos nucléicos, de modo que os ácidos nucléicos possam ser liberados da amostra e liberados no extrato, facilitando a próxima etapa de extração e purificação.Na detecção do ácido nucleico viral, a proteinase K é um dos componentes importantes na solução de amostragem do vírus.A proteinase K pode quebrar e inativar a proteína da capa do vírus, o que é mais seguro durante a fase de transporte e detecção;além disso, a proteinase K também pode degradar RNase impede a degradação do RNA viral e facilita a detecção de ácido nucleico.
A fama da noite para o dia da proteinase K
Seja no campo da pesquisa científica ou no campo do IVD, a extração de ácido nucleico é o experimento mais básico, então a proteinase K sempre foi uma existência muito importante.No entanto, no passado, a proteinase K era muito menos conhecida do que seu papel.Grande parte disso ocorreu porque a relação de oferta e demanda da proteinase K era muito estável.Poucas pessoas pensariam que o fornecimento de proteinase K seria um problema.
Com o surgimento da nova epidemia da coroa, a demanda por testes de ácido nucleico aumentou.No final de junho de 2020, a China completou quase 90 milhões de novos testes de coroa, e esse número é ainda mais alarmante em escala global.Em experimentos de extração de ácidos nucleicos, a concentração de trabalho da proteinase K é de cerca de 50-200 μg/mL.Geralmente, são necessários cerca de 100 μg de proteinase K para extrair uma amostra de ácido nucleico.No uso real, a fim de aumentar a eficiência da extração do ácido nucleico, muitas vezes a Proteinase K será usada em uma quantidade maior.A detecção de ácido nucleico do novo coronavírus trouxe uma grande demanda de proteinase K.O equilíbrio original de oferta e demanda de proteinase K foi rapidamente quebrado e a proteinase K tornou-se um importante material de prevenção epidêmica da noite para o dia.
Dificuldades na produção de proteinase K
Embora com o desenvolvimento da epidemia, o importante valor da proteinase K tenha sido valorizado pelas pessoas, é embaraçoso que, devido ao excesso de low-key da proteinase K, poucas empresas nacionais tenham se envolvido na produção de proteinase K. Quando as pessoas deseja estabelecer a produção de proteinase K Durante o processo de produção, descobriu-se que a proteinase K é uma proteína extremamente especial.É extremamente desafiador expandir a capacidade de produção da proteinase K em um curto período de tempo.
A produção em larga escala de proteinase K enfrenta as seguintes dificuldades
1. Baixa expressão
A proteinase K pode degradar não especificamente a maioria das proteínas e causar toxicidade grave à célula hospedeira de expressão.Portanto, o nível de expressão da proteinase K é geralmente muito baixo.A triagem de sistemas de expressão e cepas que expressam altamente proteinase K geralmente requer um ciclo mais longo.
2. Resíduos de pigmentos e ácidos nucléicos
A fermentação em grande escala introduz uma grande quantidade de resíduos de pigmento e ácido nucleico do hospedeiro.É difícil remover essas impurezas com um processo de purificação simples, e a purificação complexa aumenta o custo e reduz a taxa de recuperação.
3. Instabilidade
A proteinase K não é suficientemente estável, pode auto-enzimolizar-se e é difícil armazená-la de forma estável a 37°C durante muito tempo sem um agente protector.
4. Fácil de precipitar
Ao preparar o pó liofilizado da proteinase K, para garantir que o teor de sólidos da proteinase K no pó liofilizado seja grande, é necessário adicionar um agente protetor liofilizado em alta concentração, mas quando o concentração de proteinase K atinge 20mg/mL e acima, é fácil A agregação forma um precipitado, o que traz grandes dificuldades para a liofilização da proteinase K com alto teor de sólidos.
5. Grande investimento
A proteinase K tem forte atividade de protease e pode hidrolisar outras proteases no laboratório.Portanto, a proteinase K requer áreas de produção especializadas, equipamentos e pessoal para pesquisa e desenvolvimento e produção.
Solução de proteinase K da XD BIOCHEM
XD BIOCHEM has a mature protein expression and purification platform, and has rich experience in the expression and purification of recombinant proteins and optimization of production processes. Through the rapid formation of a research and development team, the large-scale production process of proteinase K has been overcome. The monthly output of freeze-dried powder is more than 30 KG. The product has stable performance, high enzyme specific activity, and no host cytochrome and nucleic acid residues. Welcome to contact XD BIOCHEM Obtain a trial package (E-mail: sales@xdbiochem.com Tel: +86 513 81163739).
As soluções técnicas da XD BIOCHEM incluem
Usando a integração de plasmídeo multicópia, cepas de alta expressão com um nível de expressão de 8g/L são selecionadas, o que supera o problema do baixo nível de expressão da proteinase K;
Através do estabelecimento de um processo de purificação em várias etapas, o citocromo hospedeiro e os resíduos de ácido nucleico da proteinase K foram removidos com sucesso abaixo do valor padrão;
Por meio da triagem de alto rendimento de formulações de tampão protetor, foi selecionado um tampão que pode armazenar de forma estável a proteinase K a 37°C;
Os tampões de triagem superam o problema de que a proteinase K é fácil de agregar e precipitar em altas concentrações e estabelece as bases para a liofilização com alto teor de sólidos da proteinase K.
Amostra de proteinase K XD BIOCHEM
Teste de estabilidade XD BIOCHEM proteinase K: não haverá alteração significativa na atividade após 80 d em temperatura ambiente
Teste de estabilidade XD BIOCHEM proteinase K: não haverá alteração significativa na atividade após 80 d em temperatura ambiente
Comparação do efeito de extração de ácido nucleico da proteinase K XD BIOCHEM e produtos concorrentes.No processo de extração de ácido nucléico, XD BIOCHEM e proteinase K competitiva são usados, respectivamente.A eficiência de extração da proteinase K XD BIOCHEM é maior e o valor de Ct do gene alvo é menor.
Horário da postagem: 31 de dezembro de 2021