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Nossos estudos anteriores revelaram seu papel crucial nos estágios inicial e tardio da infecção por KSHV.Neste estudo, pesquisamos o interactoma da ORF45 usando um painel de anticorpos monoclonais.Além das proteínas quinase regulada extracelular (ERK) e p90 ribossomal S6 quinase (RSK) previamente identificadas, encontramos várias outras proteínas copurificadas, incluindo algumas proeminentes de ~38 kDa e ~130 kDa.A espectrometria de massa revelou que a proteína de 38 kDa é a ORF33 viral e a proteína de 130 kDa é a USP7 celular (ubiquitina-específica protease 7).Mapeamos o domínio de ligação de ORF33 para os 19 aminoácidos altamente conservados do terminal carboxila (aa) de ORF45 e o domínio de ligação de USP7 para o motivo de consenso relatado na região central de ORF45.Usando coloração de imunofluorescência, observamos colocalização de ORF45 com ORF33 ou USP7 tanto em condições transfectadas quanto em células infectadas por KSHV.Além disso, notamos a relocalização dependente de ORF45 de uma porção de ORF33/USP7 do núcleo para o citoplasma.Descobrimos que o ORF45 causou um aumento no acúmulo de proteína ORF33 que foi abolido se o domínio de ligação ORF33 ou USP7 no ORF45 fosse deletado.Além disso, a deleção do terminal carboxílico conservado de ORF45 no genoma KSHV reduziu drasticamente o nível de proteína ORF33 em células infectadas com KSHV e aboliu a produção de vírions descendentes.Coletivamente, nossos resultados não apenas revelam novos componentes do interatoma ORF45, mas também demonstram que as interações entre essas proteínas são cruciais para a replicação lítica do KSHV. O herpesvírus associado ao sarcoma de Kaposi (KSHV) é o agente causador de vários cânceres humanos.O KSHV ORF45 é uma proteína multifuncional necessária para a replicação lítica do KSHV, mas os mecanismos exatos pelos quais o ORF45 desempenha suas funções críticas não são claros.Nossos estudos anteriores revelaram que toda a proteína ORF45 nas células existe em complexos de alto peso molecular.Portanto, procuramos caracterizar o interactoma de ORF45 para fornecer informações sobre suas funções durante a replicação lítica.Usando um painel de anticorpos monoclonais, pesquisamos o interatoma ORF45 em células infectadas por KSHV.Identificamos dois novos parceiros de ligação do ORF45: a proteína viral ORF33 e a protease 7 específica da ubiquitina celular (USP7).Demonstramos ainda que a interação entre ORF45 e ORF33 é crucial para a produção eficiente de partículas virais de KSHV, sugerindo que a interferência direcionada a essa interação pode representar uma nova estratégia para inibir a replicação lítica de KSHV.