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1. Investigar se a adenosina derivada do difosfato de adenosina (ADP) pode inibir a agregação plaquetária, especialmente na presença de um antagonista P2Y₁₂, onde os efeitos do ADP no receptor P2Y₁₂ seriam impedidos. A agregação plaquetária foi medida em resposta ao ativador do receptor de trombina peptídeo por contagem de plaquetas em plasma rico em plaquetas (PRP) e sangue total na presença de ADP e os antagonistas P2Y₁₂ cangrelor, metabólito ativo prasugrel e ticagrelor.Na presença de um antagonista de P2Y₁2, a pré-incubação de PRP com ADP inibiu a agregação;este efeito foi abolido pela adenosina desaminase.Nenhuma inibição da agregação ocorreu no sangue total, exceto quando o dipiridamol foi adicionado para inibir a captação de adenosina nos eritrócitos.Os efeitos do ADP no PRP e no sangue total foram replicados usando adenosina e foram diretamente relacionados a mudanças no AMPc (avaliado por fosforilação de fosfoproteína estimulada por vasodilatador).Todos os resultados foram os mesmos independentemente do agonista de P2Y₁2 usado. O ADP inibe a agregação de plaquetas na presença de um antagonista de P2Y₁2 através da conversão em adenosina.A inibição ocorre no PRP, mas não no sangue total, exceto quando a captação de adenosina é inibida.Nenhum dos antagonistas de P2Y₁2 estudados replicou os efeitos do dipiridamol nas experiências realizadas.

2.ADP é considerado um agonista de plaquetas fraco devido às respostas de agregação limitadas que induz in vitro em concentrações fisiológicas de Ca(2+) extracelular [(Ca(2+) )(o) ].A redução de [Ca(2+)](o) paradoxalmente aumenta a agregação evocada por ADP, um efeito que tem sido atribuído ao aumento da produção de tromboxano A(2).Este estudo examinou o papel das ectonucleotidases na dependência de [Ca(2+)](o) da ativação plaquetária.A redução de [Ca(2+)](o) de níveis milimolares para micromolares converteu a agregação plaquetária evocada por ADP (10 μmol/l) de uma resposta transiente para uma resposta sustentada tanto no plasma rico em plaquetas quanto nas suspensões lavadas.O bloqueio da produção de tromboxano A(2) com aspirina não teve efeito sobre essa dependência de [Ca(2+)](o).A prevenção da degradação de ADP aboliu as diferenças entre [Ca(2+)](o) baixo e fisiológico, resultando em uma agregação robusta e sustentada em ambas as condições.Medições de ADP extracelular revelaram degradação reduzida tanto no plasma quanto na solução salina contendo apirase em micromolar em comparação com milimolar [Ca(2+)](o).Conforme relatado anteriormente, a geração de tromboxano A(2) foi aumentada em baixa [Ca(2+)](o) , porém isso foi independente da atividade da ectonucleotidase(.) Os antagonistas do receptor P2Y cangrelor e MRS2179 demonstraram a necessidade de receptores P2Y(12) para agregação sustentada evocada por ADP, com um papel menor para P2Y(1) .Em conclusão, a atividade da ectonucleotidase dependente de Ca(2+) é um fator importante que determina a extensão da agregação plaquetária ao ADP e deve ser controlada em estudos de ativação do receptor P2Y.