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Efeitos de detergentes na atividade da glicoproteína P atpase: diferenças nas perturbações das atividades basais e dependentes do verapamil.

A glicoproteína P (P-gp), uma glicoproteína da membrana plasmática associada ao fenótipo de resistência a múltiplas drogas, é responsável pelo efluxo dependente de ATP de várias drogas anfifílicas.Usando vesículas de membrana preparadas a partir da linha celular multirresistente DC-3F/ADX, estudamos a perturbação das atividades basais (ou seja, na ausência de drogas) e dependentes de verapamil P-gp ATPase induzidas por vários detergentes, em não solubilizantes, bem como nas concentrações de solubilização.A solubilização progressiva da membrana com o aumento da concentração de detergente foi monitorada por experimentos de espalhamento de luz e centrifugação.Para concentrações de detergente não solubilizante, todos os detergentes testados, exceto DOC, induziram uma inibição parcial da atividade da P-gp ATPase, que não foi correlacionada com a quantidade dos vários detergentes testados incorporados nas membranas.A análise da ativação da P-gp induzida pelo verapamil revela que a atividade da P-gp ATPase é diferentemente modulada pelos vários detergentes em concentrações não solubilizantes.Assim, interações específicas entre P-gp e detergentes são mais prováveis ​​de ocorrer do que uma perturbação global da membrana.Após a solubilização pelos vários detergentes testados, a atividade basal da P-gp ATPase foi quase totalmente inibida, exceto na presença de CHAPS que foi capaz de preservar esta atividade em um nível comparável ao medido em membranas nativas.No entanto, a ativação da P-gp ATPase induzida pelo verapamil foi perdida durante a solubilização da P-gp pelo CHAPS, mas recuperou-se após a diluição do CHAPS abaixo de sua concentração micelar crítica.Estas observações indicam interações específicas entre as moléculas P-gp e CHAPS dentro das micelas mistas.No geral, nossos dados que evidenciam interações específicas P-gp/detergentes são consistentes com a localização dos sítios de transporte de drogas nos domínios transmembrana P-gp.