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Semelhante a outros vírus de RNA de cadeia positiva, os tombusvírus são replicados pelo complexo de replicase viral ligado à membrana (VRC).O VRC consiste na polimerase de RNA dependente de RNA codificada pelo vírus p92 (RdRp), a chaperona de RNA p33 viral e várias proteínas hospedeiras cooptadas.Para se tornar um RdRp funcional após sua tradução, a proteína de replicação p92 deve ser incorporada ao VRC, seguida de sua ativação.Mostramos anteriormente em um ensaio baseado em extrato de levedura livre de células que a ativação do Tomato bushy stunt virus (TBSV) RdRp requer um fator hospedeiro solúvel.Neste artigo, identificamos a proteína de choque térmico celular 70 (Hsp70) como o fator hospedeiro cooptado necessário para a ativação de um TBSV RdRp recombinante truncado N-terminalmente.Além disso, o bloqueio baseado em moléculas pequenas da função Hsp70 inibe a síntese de RNA pelo tombusvirus RdRp in vitro.Além disso, mostramos que fosfolipídios neutros, ou seja, fosfatidiletanolamina (PE) e fosfatidilcolina (PC), aumentam a ativação de RdRp in vitro.Em contraste, o fosfatidilglicerol (PG) mostra um efeito inibitório forte e dominante na ativação in vitro de RdRp.Também demonstramos que PE e PC estimulam a interação RdRp-viral plus-RNA [(+)RNA], enquanto PG inibe a ligação do RNA viral ao RdRp.Com base nos papéis estimuladores versus inibitórios de vários fosfolipídios na ativação de RdRp do tombusvírus, propomos que a composição lipídica das membranas subcelulares direcionadas pode ser utilizada pelos tombusvírus para regular a nova montagem do VRC durante o curso da infecção. A RNA polimerase dependente de RNA codificada pelo vírus (RdRp), que é responsável pela síntese da progênie de RNA viral em células infectadas de vários vírus de RNA de fita positiva, é inicialmente inativo.É provável que essa estratégia evite a síntese de RNA viral no citosol, que levaria rapidamente à indução de respostas antivirais celulares desencadeadas por RNA.Durante a montagem do complexo de replicase ligado à membrana, o RdRp viral torna-se ativado por meio de um processo incompreendido que torna o RdRp capaz de síntese de RNA.Usando TBSV RdRp, mostramos que a chaperona Hsp70 celular cooptada e os fosfolipídios neutros facilitam a ativação de RdRp in vitro.Em contraste, o fosfatidilglicerol (PG) tem um efeito inibitório dominante na ativação in vitro de RdRp e na interação RdRp-RNA viral, sugerindo que o microdomínio membranoso que envolve o RdRp afeta muito sua capacidade de síntese de RNA.Assim, a ativação do RdRp viral provavelmente depende de vários componentes do hospedeiro nas células infectadas.