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Mycobacterium tuberculosis pode persistir por décadas no hospedeiro humano.Vias de resposta rigorosas envolvendo polifosfato inorgânico [poli(P)], que é sintetizado e hidrolisado por polifosfato quinase (PPK) e exopolifosfatase (PPX), respectivamente, desempenham um papel regulador chave na persistência bacteriana.Mostramos aqui que o acúmulo de poli(P) de M. tuberculosis está temporariamente ligado à restrição do crescimento bacilar.Também identificamos M. tuberculosis Rv1026 como uma nova exopolifosfatase com atividade hidrolítica contra poli(P) de cadeia longa.Usando um sistema de expressão induzível por tetraciclina para derrubar a expressão de Rv1026 (ppx2), descobrimos que o acúmulo de poli(P) de M. tuberculosis leva a um crescimento lento e suscetibilidade reduzida à isoniazida, aumento da resistência ao calor e pH ácido e aumento da sobrevivência intracelular durante a infecção por macrófagos.Por microscopia eletrônica de transmissão, a cepa knockdown ppx2 exibiu aumento da espessura da parede celular, que foi associada à redução da permeabilidade da parede celular a drogas hidrofílicas, em vez de indução de bombas de efluxo de drogas ou formação de biofilme alterada em relação ao controle de vetor vazio.A análise transcriptômica e metabolômica revelou um downshift metabólico do knockdown de ppx2 caracterizado por transcrição e tradução reduzidas e um downshift dos níveis de glicerol-3-fosfato.Em resumo, o poli(P) desempenha um papel importante na restrição do crescimento de M. tuberculosis e no downshift metabólico e contribui para a tolerância a antibióticos através da permeabilidade alterada da parede celular. )ppGpp, acredita-se que medeie a persistência do Mycobacterium tuberculosis.Neste estudo, identificamos uma nova enzima (Rv1026, PPX2) responsável pela hidrólise de poli(P) de cadeia longa.Uma cepa de M. tuberculosis geneticamente modificada deficiente no gene ppx2 apresentou níveis aumentados de poli(P), que foram associados à interrupção precoce do crescimento bacteriano e suscetibilidade reduzida ao fármaco de primeira linha isoniazida, bem como aumento da sobrevivência bacteriana durante a exposição ao estresse condições e dentro de macrófagos.Em relação à cepa controle, o mutante apresentou aumento da espessura da parede celular e redução da permeabilidade ao fármaco.A expressão gênica global e a análise de metabólitos revelaram expressão reduzida da maquinaria transcricional e translacional e uma mudança na utilização da fonte de carbono.Em resumo, a regulação do balanço de poli(P) é crítica para a formação de persistência em M. tuberculosis.