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A proteína ORF45 do herpesvírus associado ao sarcoma de Kaposi (KSHV) é uma proteína do tegumento imediata-precoce específica do gamaherpesvírus.Nossos estudos anteriores revelaram seu papel crucial nos estágios inicial e tardio da infecção por KSHV.Neste estudo, pesquisamos o interactoma da ORF45 usando um painel de anticorpos monoclonais.Além das proteínas quinase regulada extracelular (ERK) e p90 ribossomal S6 quinase (RSK) previamente identificadas, encontramos várias outras proteínas copurificadas, incluindo algumas proeminentes de ~38 kDa e ~130 kDa.A espectrometria de massa revelou que a proteína de 38 kDa é a ORF33 viral e a proteína de 130 kDa é a USP7 celular (ubiquitina-específica protease 7).Mapeamos o domínio de ligação de ORF33 para os 19 aminoácidos altamente conservados do terminal carboxila (aa) de ORF45 e o domínio de ligação de USP7 para o motivo de consenso relatado na região central de ORF45.Usando coloração de imunofluorescência, observamos co-localização de ORF45 com ORF33 ou USP7 tanto em condições transfectadas quanto em células infectadas por KSHV.Além disso, notamos a relocalização dependente de ORF45 de uma porção de ORF33/USP7 do núcleo para o citoplasma.Descobrimos que o ORF45 causou um aumento no acúmulo de proteína ORF33 que foi abolido se o domínio de ligação ORF33 ou USP7 no ORF45 fosse deletado.Além disso, a deleção do terminal carboxílico conservado de ORF45 no genoma KSHV reduziu drasticamente o nível de proteína ORF33 em células infectadas com KSHV e aboliu a produção de vírions descendentes.Coletivamente, nossos resultados não apenas revelam novos componentes do interatoma ORF45, mas também demonstram que as interações entre essas proteínas são cruciais para a replicação lítica do KSHV. O herpesvírus associado ao sarcoma de Kaposi (KSHV) é o agente causador de vários cânceres humanos.O KSHV ORF45 é uma proteína multifuncional necessária para a replicação lítica do KSHV, mas os mecanismos exatos pelos quais o ORF45 desempenha suas funções críticas não são claros.Nossos estudos anteriores revelaram que toda a proteína ORF45 nas células existe em complexos de alto peso molecular.Portanto, procuramos caracterizar o interactoma de ORF45 para fornecer informações sobre suas funções durante a replicação lítica.Usando um painel de anticorpos monoclonais, pesquisamos o interatoma ORF45 em células infectadas por KSHV.Identificamos dois novos parceiros de ligação do ORF45: a proteína viral ORF33 e a protease 7 específica da ubiquitina celular (USP7).Demonstramos ainda que a interação entre ORF45 e ORF33 é crucial para a produção eficiente de partículas virais de KSHV, sugerindo que a interferência direcionada a essa interação pode representar uma nova estratégia para inibir a replicação lítica de KSHV.