Produtos

1.Os métodos de caracterização de metabólitos são ferramentas importantes para a medição de pools de metabólitos em sistemas biológicos.Embora a maioria dos métodos de perfis de metabólitos relatem intensidades relativas ou dependam de alguns padrões internos que representam todos os metabólitos, o requisito final para uma descrição quantitativa do pool de metabólitos em células e fluidos biológicos é a determinação da concentração absoluta.Relatamos aqui um método de perfil de metabólito direcionado de alto rendimento e sensível por cromatografia gasosa/espectrometria de massa em tandem (GC/MS/MS), permitindo a quantificação absoluta de todos os metabólitos detectados.O método é baseado na derivatização e quantificação de cloroformato de metila adicionando amostras com padrões de metabólitos separadamente derivatizados com reagentes de derivatização deuterados.A tradicional ionização por impacto de elétrons é substituída pela ionização química positiva, uma vez que esta última preserva em muito maior extensão o íon molecular e outros fragmentos de alto peso molecular.Isso facilitou a seleção de transições únicas de MS/MS entre os muitos metabólitos coeluentes.Atualmente, o novo método GC/MS/MS compreende 67 metabólitos primários comuns, dos quais a maioria pertence aos grupos de ácidos orgânicos amino e não amino.Mostramos a aplicabilidade do método em amostras de urina e soro.O método é uma melhoria significativa da metodologia atual para perfis de metabólitos GC/MS quantitativos de aminoácidos e ácidos orgânicos não amino.

O 2,24S-hidroxicolesterol (24OHC) e o 27-hidroxicolesterol (27OHC) são dois oxisteróis estruturalmente semelhantes de diferentes origens - o primeiro formado quase exclusivamente no cérebro e o último formado em menor extensão no cérebro do que na maioria dos outros órgãos.HIPÓTESE A SER TESTADA: Danos neuronais e/ou desmielinização causam aumento do fluxo de 24OHC do cérebro para o líquido cefalorraquidiano (LCR), enquanto um defeito na barreira hematoencefálica causa aumento do fluxo de 27OHC da circulação para o LCR. Diluição de isótopos-massa a espectrometria foi usada para analisar os dois oxisteróis no LCR e no plasma de mais de 250 pacientes com diferentes doenças neurológicas e geriátricas. Os níveis dos dois oxisteróis no LCR foram muito mais afetados pelas diferentes doenças do que os níveis plasmáticos.Pacientes com doenças desmielinizantes ativas apresentavam níveis aumentados de 24OHC no LCR com relação 24OHC/27OHC relativamente alta.Os pacientes com meningite em geral apresentavam níveis elevados de ambos os esteróides com uma relação 24OHC/27OHC baixa.Os pacientes com doença de Alzheimer apresentaram níveis ligeiramente aumentados de 24OHC no LCR com menor aumento de 27OHC.Pacientes com esclerose múltipla tendem a ter níveis mais altos de 24OHC durante os períodos ativos com uma alta relação 24OHC/ 27OHC. Medições dos dois oxisteróis no LCR e no plasma podem agregar significativamente aos métodos bioquímicos existentes para avaliação de doenças neurológicas.